Лабораторные исследования в репродуктологии

Преимплантационное генетическое тестирование (ПГТ, ПГД, ПГС)  — это самый ранний вид пренатального ДНК-тестирования, который выполняется на эмбрионах, полученных в результате ЭКО, ещё до их переноса их в полость матки.
Существуют 3 вида ПГТ.

ПГТ-М (моногенных заболеваний) – этот вид тестирования позволяет выявить у эмбриона наличие специфической мутации, проводящей к моногенному заболеванию.  

ПГТ-СП (структурных перестроек) – диагностика проводимая, когда в кариотипах родителей выявлены изменения.

Проведение ПГТ-М и ПГТ-СП показано:

  • носителям генных мутаций, сцепленных с X-хромосомой;
  • высоком риске рождения детей с наследственными заболеваниями;
  • носителям генных мутаций, вызывающие моногенные заболевания: аутосомно-рецессивные, аутосомно-доминантные, имеющие высокий риск передачи наследственной патологии потомству;
  • носителям хромосомных аномалий: числовых и структурных аберраций хромосом;
  • носителям генных мутаций, сцепленных с Y-хромосомой;
  • носителям генных мутаций, значительно повышающих риск развития онкологических заболеваний и болезней с поздней манифестацией;
  • носителям наследственных гематологических заболеваний;
  • женщинам с носительством мутаций мтДНК, имеющим высокий риск тяжелого течения митохондриальной болезни у потомства;
  • семьям, в которых есть ребенок больной спорадическим гематологическим заболеванием, нуждающийся в пересадке донорских стволовых гемопоэтических клеток для продолжения жизни.

ПГТ-А (анеуплоидий), тестирование хромосомных аномалий.
ПГТ-А (ранее ПГС) самый частый вид преимплантационного генетического тестирования, наиболее известный как врачам, так и пациентам. В ходе данного исследования выявляются нарушения, связанные с изменением количества хромосом (анеуплоидии).

Показаниями к проведению ПГТ-А являются:

  • первичное бесплодие у пациенток старше 37 лет,
  • привычное невынашивание беременности с хромосомной патологией плода при отсутствии изменений в кариотипах родителей;
  • биохимические беременности без плодного яйца;
  • более 2-х неудачных попыток при переносе бластоцист хорошего или отличного качества;
  • поздний репродуктивный возраст.

По мнению ряда авторов ПГТ-А, помимо практически полного исключения таких важных хромосомных заболеваний как синдром Дауна, снижает так же вероятность невынашивания беременности вследствие хромосомной патологии и увеличивает частоту рождения здорового ребёнка на перенос.

На сегодняшний день в практике для оценки хромосомного набора эмбриона применяют два метода: сравнительная геномная гибридизация (aCGH) и высокопроизводительное секвенирование нового поколения (NGS). И у того и у другого метода есть противники и сторонники. Если вкратце и доступно объяснить отличие, то первый этап одинаков и в том и другого методе — биопсированные клетки помещаются в пробирки со специальным буфером (одинаковым для aCGH и NGS), после чего проходит этап полногеномной амплификации — WGA (многократного умножения генетического материала).  Затем технологии значительно различаются.

При aCGH метят продукты WGA и в последующем наносят на микрочип (который содержит заранее известные последовательности). Так же микрочип так же обязательно наносятся два нормальных образца (мужская и женская ДНК) и гибридизуются. В дальнейшем исследуемые образцы сравнивают с контрольными нормальными ДНК (именно поэтому гибридизация сравнительная).

При проведении же NGS после WGA идет этап создания так называемых библиотек, когда к множеству фрагментов присоединяются специфические адаптеры, которые помогают не только различить исследуемые образцы, но и так же затем станут мишенями для считывания. После этого с помощью секвенатора происходит многократное прочтение исследуемых фрагментов, а программа распределяет эти прочитанные фрагменты по хромосомам, выстраивая их в хромосомы. В результате после анализа данных выводятся профили по каждой из исследуемых хромосом, причём картинки в обоих случаях очень похожи.

 Надо понимать что оба метода одинаково верно определяют количественные изменения хромосомного набора. В целом есть ньансы в следуующем: сторонники NGS говорят о более точном определении мозаицизма, сторонники же aCGH уповают на большую чувствительность при определении микроделеций и микродупликаций, что особенно важно для пациентов с транслокациями.

При этом на сегодняшний день данные говорят, что вне зависимости от выбранного метода, частота имплантации и наступление беременности очень высока.

Пациентам важно помнить, что ПГТ-А лишь вспомогательный инструмент выбора эмбрионов для переноса, и очень важно для достижения результата насколько качественно проводятся этап стимуляции и эмбриологические этапы.

ПГТ-А не может «скомпенсировать» другие этапы ЭКО. Поэтому в нашей клинике врачи много лет работают с максимальным взаимопонимание и чувством ответственности за тот вклад который они привносят в «свой» этап ЭКО.